尊龙凯时关注DNA甲基化的研究,这一过程是生物体内由DNA甲基转移酶(DNMTs)催化的反应。该反应利用S-腺苷甲基氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶(mC)。DNA甲基化通常会抑制基因表达,而去甲基化则可诱导基因的重新活化和表达,从而在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。
在实验室中,可以通过亚硫酸氢盐处理基因组DNA,使所有未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则保持不变。接着,再设计针对这两种不同序列的引物进行PCR扩增。通过电泳分析MSP扩增产物,如果针对甲基化DNA链的引物出现扩增片段,就意味着该位点存在甲基化;反之,则表示该位点未发生甲基化。
同样,通过亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶。随后,设计BSP引物进行PCR扩增,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。最终,通过将PCR产物克隆至载体并进行测序,可以确定CpG位点是否发生了甲基化,这种方法被称为BSP-克隆测序法。
在样本采集方面,动物组织需要新鲜组织量为100mg(相当于黄豆大小),最少50mg(相当于绿豆大小),并使用干冰运输。细胞样本应为1×10^6个,收集细胞沉淀后同样使用干冰运输。而全血样本则需要至少1mL的新鲜血液,使用EDTA抗凝管,并在-20度下运输。
通过尊龙凯时的科研支持,研究人员能够更准确地研究DNA甲基化的机制及其对基因表达的调控,推动生物医学领域的进步。