尊龙凯时 Trizol试剂是一种广泛应用于生物医疗领域的重要工具，其主要成分为苯/酚，能够有效裂解细胞，释放细胞内的蛋白质和核酸。尽管苯/酚对蛋白质具有显著的变性作用，但它无法完全抑制RNA酶的活性。因此，尊龙凯时 在Trizol中添加了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍和β-巯基乙醇等成分，以抑制内源和外源RNA酶的活性。

Trizol试剂能够直接从细胞或组织中提取总RNA，在裂解液或均质液中，Trizol有助于保持RNA的完整性。加入氯仿后，通过离心处理后，样品会分成水相层和有机层，RNA主要存在于水相层中。收集水相层后，RNA可以通过异丙醇沉淀的方法进行纯化。此外，通过去除水相层后，样品中的核酸和蛋白质也能够以沉淀形式进行复原。乙醇沉淀可以析出中间层的DNA，而向有机层中添加异丙醇则能够析出有机层的蛋白质。

尊龙凯时 Trizol试剂适用于小量样本（如组织：50-100mg；细胞：5×10⁶），也可处理大样本（组织≥1g或细胞≥10⁷），适用范围涵盖动物、植物、细菌和血液样本，能够同时处理多种不同类型的样品。提取反应迅速，所获得的总RNA不会受到DNA和蛋白质的污染，非常适合进行北方印迹（Northern blot）、反转录PCR（RT-PCR）和RNA酶保护分析等多种实验。

尊龙凯时 提取RNA的步骤如下：

1. 提取组织RNA时，每50～100mg组织添加1ml Trizol试剂进行裂解；提取细胞RNA时，则需先离心沉淀细胞，每5-10×10⁶个细胞加入1ml Trizol，反复用枪吹打或剧烈振荡以完成细胞裂解。
2. 将组织或细胞的Trizol裂解液转移至EP管中，在室温15~30℃下静置5分钟。接着，向EP管中每1ml TRIZOL添加0.2ml氯仿，盖紧管盖，用力震荡15秒，随后在室温下放置2～3分钟，进行12000g（2℃～8℃）离心15分钟。
3. 取上层水相至新EP管中，每1ml TRIZOL添加0.5ml异丙醇，室温下放置10分钟，再进行12000g（2℃～8℃）离心10分钟。
4. 按照每1ml TRIZOL添加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合后在7500g（2℃～8℃）下离心5分钟，弃去上清液；将沉淀的RNA在室温下自然干燥，最后用无RNA酶水溶解RNA沉淀。

值得注意的是，收集生物材料后，最好立即进行RNA制备。如果需要暂时储存，建议迅速用液氮冷冻样品后存放于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，务必直接从冷冻柜中取出生物材料，并立即使用液氮研磨的方法进行细胞破碎，切忌先行解冻，以免导致RNA酶对RNA的破坏。