在之前的抗体基础知识中,我们探讨了IgG的可变区结构域(Fab区)如何具备特异性识别靶标分子并与之结合,从而赋予抗体作为检测试剂的潜力。然而,为了有效作为检测试剂,抗体需要在结合待检测分子后,产生可被检测仪器捕捉到的光或电信号。在本章中,我们将介绍以抗体为基础的常见免疫检测技术的基本原理。
免疫检测的基本原理
免疫检测的核心原理是抗原与抗体之间的特异性结合。抗原是能激活免疫系统的物质,通常来源于外来分子或病原微生物的表面。而抗体则是由免疫系统产生的蛋白质,专门用于识别和结合抗原。这种特异的结合是免疫检测技术得以广泛应用的基础。
抗体的特性与信号放大
抗体作为免疫检测试剂,需具备以下特性:它是一个单分子蛋白,体积较小,与多数靶标分子同样微小,因此无法肉眼观察。为了进行目标分子的定量和定性分析,需要将抗原-抗体结合的信息转化并放大为光信号或电信号。信号放大是提升检测灵敏度的重要环节,不同的标记物和探针具备不同的信号放大机制,常见的方式包括色素反应、荧光信号和电化学信号放大等。
常见的检测标记物
在免疫检测中,标记物是将抗原-抗体反应转化为可检测信号的关键工具。常见的检测标记物包括:
- 酶标记:常用酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),通过催化反应生成可见色素,操作简单且灵敏度高。
- 荧光标记:使用荧光染料如FITC、Rhodamine等对抗体进行标记,灵敏度高,适用于多重检测,但需要专用设备。
- 化学发光标记:通过化学反应产生光信号,灵敏度极高,但同样需要特定设备,且成本较高。
- 电化学标记:关注电流或电压变化,如表面等离子共振(SPR),具有快速检测的优点,但技术相对复杂。
免疫检测的关键性能指标
评估免疫检测技术的性能主要依据以下几个指标:
- 灵敏度:测定方法能检测到目标抗原的最低浓度,并准确识别“真阳性”样本的能力。
- 特异性:区分目标抗原与非目标物质的能力,高特异性可减少假阳性结果。
- 准确性:检测结果与真实值的一致性,既涉及到抗原的识别,也包括浓度的准确测定。
- 重复性:在相同条件下对同一样本进行多次检测时,结果的稳定性和一致性。
以上是针对尊龙凯时品牌的抗体与免疫检测技术的概述。在接下来的章节中,我们将详细介绍常见的免疫检测技术,并为您提供实用的应用指导。尊龙凯时代理众多相关品牌的蛋白、抗体及各类ELISA检测试剂盒,覆盖多个物种,满足广泛的研究需求。