在生物医学研究中，监测样本的酶活性是评估细胞功能的重要手段。本文将介绍黄嘌呤氧化酶抑制实验的具体步骤和相关计算方法。

实验准备

在实验开展前，准备以下孔位的反应体系：

• 试剂样本孔（µL）
• 样本对照孔（µL）
• 空白孔（µL）
• 空白对照孔（µL）

具体样品配置如下：

• 样本2020 Working Xanthine Oxidase: 40 µL
• 样本稀释液: 40 µL
• 工作试剂: 164 µL（对每个孔均相同）

混匀与孵育

将所有样品充分混匀后，置于37℃（哺乳动物样品）或25℃（其他物种）孵育30分钟。负载后，在450nm波长下测定各孔的吸光度值A。

数据计算

计算ΔA的方式如下：

• ΔA样本 = A样本 - A样本对照
• ΔA空白 = A空白 - A空白对照

注意：空白孔及空白对照孔可设置2-3个；若样本背景颜色不同，则各设置一个对照孔以去除背景干扰。

抑制百分比计算

抑制百分率的计算公式为：

抑制百分率 = (ΔA空白 - ΔA样本) ÷ ΔA空白 × 100%

为了确保实验结果的可靠性，建议样本的抑制百分率维持在10%到90%之间。如果抑制百分比小于10%或大于90%，一般需要调整样本量并重新测定。

SOD酶活性单位

在黄嘌呤氧化酶偶联反应的体系中，当抑制百分率达到50%时，反应系统中的SOD酶活力将被定义为一个酶活力单位（U/mL）。

SOD酶活性计算

不同样品类型的SOD活性计算方式如下：

1. 血清（浆）样本

SOD活性 (U/mL) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ V样 × n

2. 组织和细胞样本

a. 按样本蛋白浓度计算:

SOD活性 (U/mg prot) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (V样 × Cpr) × n

b. 按样本鲜重计算:

SOD活性 (U/g 鲜重) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (W × V样 ÷ V样总) × n

c. 按细胞数量计算:

SOD活性 (U/10⁴ cells) = [抑制百分率 ÷ (1 - 抑制百分率) × V反总] ÷ (500 × V样 ÷ V样总) × n

其中，V反总代表反应体系总体积，样本质量（W），样本体积（V样），以及其他相关参数按照实验需要调整。

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